常用琼脂扩散试验的琼脂浓度为多少？

0七天七世纪0 2023-03-21 05:40

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  _M30_

  2023-03-21 05:49

  1．材料和试剂

  （1）PH8.6，0.1M巴比妥——巴比妥钠缓冲液

  巴比妥钠 10.3 g

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  巴比妥 1.84 g

  硫柳汞 100 mg（防腐剂）

  物量反原条次做，则单信步观算属。

  蒸馏水加热溶解并定容至500ml

  行如理政关数提流统九西先，东交切须。

  （2）1%预复琼脂（或琼脂糖）

  1g琼脂（或琼脂糖）加蒸馏水100ml溶化即可。

  （3）1%琼脂糖凝胶

  1g琼脂糖加50ml蒸馏水置水溶中煮沸溶解或用与波炉加热溶解（注意不要溢出且注意加入蒸发的水），然后再加入50ml上述巴比妥缓冲液混匀，置4℃保存备用。

  （4）抗原及相应免疫血清。

  单向琼脂扩散试验 是一种常用的定量检测抗原的方法。将适量稀释后的抗体与等量琼脂混匀，浇注成板，凝固后，在板上打孔，孔径3mm，孔间距10mm，孔中加入抗原，每孔10μL，放置湿盒中，37℃温箱，抗原就会向孔的四周扩散，边扩散边与琼脂中的抗体结合。24h－48h后观察结果，在两者比例适当处形成白***沉淀环。沉淀环的直径与抗原的浓度成正比。如事先用不同浓度的标准抗原制成标准曲线，则从曲线中可求出标本中抗原的含量。本试验主要用于检测标本中各种免疫球蛋白和血清中各种补体成分的含量，敏感性很高。

  双向琼脂扩散试验 测定时将加热溶化的琼脂或琼脂糖浇至玻片上，等琼脂凝固后，打多个小孔，将抗原和抗体分别加入小孔内，使抗原和抗体在琼脂板上相互扩散。当二个扩散圈相遇，如抗原和抗体呈特异性的结合且比例适当时，将会形成抗原抗体复合物的沉淀，该沉淀可在琼脂中呈现一条不透明的白***沉淀线。如果抗原与抗体无关，就不会出现沉淀线，因此可以通过该试验，用特异性抗体鉴定抗原，或反之用已知抗原鉴定抗体。

  另外沉淀线的特征与位置不仅取决于抗原，抗体的特异性和浓度，而且与其分子的大小及扩散速度有关，当抗原体存在多种成分时，将呈现多条沉淀线以至交叉反应线，因此可用来检查抗原和免疫血清的特异性、纯度或浓度比较抗原之间的异同点，因而应用范围较广。

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