中间克隆载体、中间转化载体、一元转化载体和双元转化载体分别是什么?

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__yin为有你
__yin为有你 2023-03-17 17:48
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  • 2023-03-17 18:05

    根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)是一种能诱发植物产生肿瘤的细菌,根癌农杆菌中包含有一个诱导植物产生肿瘤的质粒(Tumor inducing plasmid),简称为Ti质粒。野生型农杆菌的Ti质粒,含有两个与致瘤有关的区域:一个是T-DNA区(transferred DNA region),含致瘤基因;另一个是毒性区(Virulence region),在T-DNA的切割、转移与整合过程中起作用。农杆菌通过侵染植物伤口,可将T-DNA插入到植物基因组中。因此,农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。将目的基因插入到经过改造的T-DNA区,借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合。Agrobacterium tumefaciens LBA4404含有经过改造的Ti质粒pAL4404,其只含有vir和ori区域,T-DNA区被删除。利用LBA4404进行植物基因转导时,需要与合适的双元载体配合使用,如: pRI909,其含有T-DNA区,此区中的致瘤基因被删除,并插入了适当的选择标记和多克隆位点。实验时,将目的基因插入双元载体,将其电转化至LBA4404中,重组的DNA可以通过pAL4404质粒上的vir区来感染植物细胞,将外源基因整合到植物细胞的染 {MOD}体DNA上。

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